HPLC : CHOIX ET OPTIMISATION DES PERFORMANCES DES COLONNES
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Durée : 3 jours
Prix : 1490 € H.T.
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PUBLIC - NIVEAU
Personnes ayant une expérience en HPLC et souhaitant optimiser l’utilisation de leurs colonnes.
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OBJECTIF
Obtention des informations nécessaires au choix d’une colonne HPLC et à son utilisation optimale. Compréhension des paramètres responsables d’une diminution des performances de la colonne et des méthodes pratiques d’optimisation de celles-ci.
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PROGRAMME
1. Le choix d’une technique chromatographique
. Les grandes familles de composés
- Polymères
- Protéines, peptides
- Acides nucléiques
- Sucres, oligosaccharides
- Ions inorganiques
. Les autres molécules organiques
- Influence du poids moléculaire
- Influence de la solubilité
- Influence de la polarité
2. Technologies et méthodes de fabrication des phases stationnaires pour l’HPLC
. Le traitement de la silice
. Les techniques de greffage
. Conséquences sur les caractéristiques des colonnes
. La caractérisation des phases stationnaires
. Le choix de la phase stationnaire
. L’U-HPLC
- Objectifs et méthodes
- Les diagrammes cinétiques : choix de la méthode
- Les supports monolithiques
- Les supports « Fused Core »
. La chromatographie des composés polaires
- Phase normale
- Phase inverse
- Interaction hydrophile
. La chromatographie des composés ionisables
- Choix de la méthodologie
- Règles de préparation des tampons pour la chromatographie
- Choix de la phase stationnaire en fonction du pH du tampon
. Effets des phases mobiles tamponnées sur la phase stationnaire
- Influence du contre-ion
- Influence de l’ion
- Influence de la concentration
- Influence de la température
. Influence de la température sur la rétention
3. L’utilisation des colonnes HPLC
. Installation et équilibrage
. Utilisation
. Suivi des performances
. Protection et stockage
. L’utilisation du gradient d’élution
. L’optimisation de la résolution
- Influence de la rétention
- Influence de l’efficacité
- Influence de la sélectivité
. Contrôle qualité des colonnes
4. Résolution des anomalies de fonctionnement
. Problèmes liés à la forme des pics
- Effets extra colonne
- Effets de surcharge
- Effets des interactions secondaires
- Effets de tassement
- Effets des équilibres secondaires
. Problèmes liés au temps de rétention
- Variation aléatoire du temps de rétention
- Dérive du temps de rétention
. Autres anomalies
- Pics « fantômes », perte de charge
- Dérive de la ligne de base
5. Le test de conformité d’une analyse chromatographique
. Répétabilité
. Résolution
. Asymétrie
. Efficacité
. Bruit de fond, rapport signal / bruit
. Dérive
. Paramètres de rétention
. Pression, facteurs de réponse
Au cours de cette formation seront débattues les questions des participants quand à leurs difficultés d’analyse en HPLC, il est possible pour les participants d’amener des exemples de procédures dont la mise en œuvre pose problème.
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FORMATEUR
Jean-Marc ROUSSEL. Consultant en Développement et Validation Analytique, Professeur Associé à l’université de Paris XI.
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Pour en savoir plus :
www.idecos.org
Ce stage s’adresse aux techniciens et ingénieurs désirant produire des protéines recombinantes par le système Baculovirus ou par transfection stable de cellules de drosophile. Ces différents systèmes seront étudiés étape par étape au cours du stage.
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